抗小鼠PD-1单抗(RMP1-14)如何用于体内PD-1阻断研究？

1、背景介绍

程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）是一种免疫检查点蛋白，目前被广泛用作靶向剂，用于开发癌症患者的免疫治疗。其在癌症和自身免疫性疾病的发生发展及治疗中的作用已得到充分研究。针对PD-1蛋白的人源化单克隆抗体已被证明对头颈部癌患者、伴有非小细胞肺癌的转移性黑色素瘤患者以及肾细胞癌患者有益。截至目前，美国FDA已批准三种免疫检查点抑制剂（ICI），包括PD-1抑制剂、PD-L1抑制剂（程序性细胞死亡配体1）和CTLA-4抑制剂（细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4）[1, 2, 3]。因此，一些已确立的抗PD-1药物，如西米普利单抗（Cemiplimab）、尼沃鲁单抗（Nivolumab）、帕博利珠单抗（Pembrolizumab）和RMP1-14，在研究人员中因其一致性和受欢迎度而被广泛用于体内PD-1阻断研究[4]。在本综述中，我们将探讨RMP1-14的显著特征、体内推荐做法和最大化研究结果的政策。

2、RMP1-14抗体的作用机制

单克隆抗体RMP1-14是一种小鼠抗PD-1抗体，使用杂交瘤技术设计而成[5]。PD-1是一种细胞表面受体，属于CD28家族成员，由激活的T细胞和B细胞中的pdcd-1基因编码。研究表明，这些免疫细胞在小鼠中治疗自身免疫性疾病并维持外周耐受。然而，PD-1配体结合会阻止 T 细胞激活和细胞因子释放，最终降低活体的免疫反应。像RMP1-14这样的抗PD-1抗体，与小鼠PD-1的细胞外结构域（基于免疫受体酪氨酸基序）特异性相互作用，导致RMP1-14不与PD-L1或PD-L2结合[6, 7, 8, 9]。

3、RMP1-14抗体如何为体内研究设计

RMP1-14抗体在设计使用进行体内研究时，应考虑多个因素以确保获得最佳结果。肿瘤类型、免疫系统完整性以及遗传背景等因素均可能影响对PD-1阻断的应答。首先，选择合适的动物模型至关重要。同系肿瘤模型，包括MC38结肠癌或B16黑色素瘤，常用于评估RMP1-14抗体的疗效。其次，确定RMP1-14抗体给药的最优剂量和方案非常重要：典型的给药方案为每次注射200-500 μg，通过腹腔内途径每3-4天给药一次。然而，具体的剂量和频率可能需要根据肿瘤模型和研究目标进行调整。

在向目标小鼠注射抗体时，选择稀释剂对于确保抗体的稳定性和动物的安全性至关重要。以下是常用的稀释剂：

磷酸盐缓冲盐水（PBS）：PBS 是一种广泛使用的缓冲液，因其等渗性和对细胞无毒的特性而备受青睐。它可维持pH值和渗透压，这对于体内应用至关重要。
生理盐水：这是另一种用于制备稀释剂的选择，特别是在缓冲作用并非关键的体内应用中。生理盐水是等渗的，可保持细胞的生理平衡。
其他缓冲液：根据具体应用和抗体的特性，可使用其他缓冲系统，如 Tris 缓冲盐水（TBS）。然而，必须检查这些缓冲液与抗体和动物模型的相容性。

此外，缓冲液必须无菌且不含可能伤害体内小鼠的有毒化学物质（热原、内毒素和防腐剂）。它必须能够维持抗体的可靠性和活性，以抵抗对目标动物的任何伤害或应激。

研究报道，RMP1-14抗体可与多种药物结合，如化疗、放疗、蛋白质疗法和其他免疫疗法，从而产生显著的抗肿瘤反应。因此，在这些药物的开发过程中，必须考虑它们的协同或拮抗作用、时间优化以及治疗方案。此外，对RMP1-14抗体结果的理解在很大程度上取决于试验方法的规则和设计。研究中必须设置适当的对照组（同型对照抗体或载体药物），以解释非特异性因素。此外，应使用随机或盲法分组，以减少偏倚并确认数据的准确性。

4、RMP1-14抗体在体内研究中的推荐做法

RMP1-14抗体在体内研究中要取得成功，必须遵循一些建议：

RMP1-14抗体应保持标准的储存政策和抗体制备，应在4°C下避光储存，以防止其降解。

RMP1-14抗体在给药过程中，其注射过程和无菌技术必须标准化，以防止感染风险和剂量不准确。有几种注射方法可供选择，如腹腔注射、静脉注射和肿瘤内注射，其中第一种最为常见。

此外，RMP1-14抗体的效能取决于适当的评估和监测系统。一些典型参数，包括生存分析、肿瘤生长尺寸、免疫组织化学和流式细胞术，通常用于评估PD-1阻断性能。

5、故障排除的常见问题

尽管RMP1-14抗体的疗效已得到证实，但研究人员在体内研究过程中可能会遇到各种挑战。由于肿瘤模型、动物品系或环境因素的差异，治疗反应可能会发生变化。使用特征良好的模型并保持一致的实验条件对于减轻变化的结果至关重要。

PD-1阻断有时会观察到不良反应，包括自身免疫或毒性。密切监测动物健康状况和适当的管理策略可能是减少剂量或停止治疗所必需的。

在某些情况下，开发针对RMP1-14的抗药物抗体（ADAs）可能会随着时间推移限制其疗效。间歇性给药或免疫调节等策略可能有助于降低 ADA 形成的风险。如果观察到反应不佳，可以考虑优化策略来调整给药方案，结合其他疗法，或探索替代给药途径。

6、结论

RMP1-14抗体是一种针对PD-1的有影响力的抗体，用于动物模型研究和免疫治疗药物生产。在整个体内研究过程中，可能会激发免疫肿瘤学进步和有价值的试剂，这些是RMP1-14抗体最重要的特征。

随着该领域的不断发展，RMP1-14抗体的新应用和机会正在涌现，例如与新型免疫疗法结合使用，或用于癌症以外的疾病研究。通过了解最新发展并在科学界分享见解，我们可以共同利用RMP1-14抗体的力量，推动免疫治疗研究取得有意义的进展。RMP1-14抗体在体内研究的主要优势是它在各种肿瘤模型中已被证明的有效性，以及其成熟的剂量和给药方案。此外，RMP1-14抗体可从多家供应商购得，确保研究人员易于获取和重复使用。

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7、参考文献

1.  Shiravand Y, Khodadadi F, Kashani SMA, Hosseini-Fard SR, Hosseini S, Sadeghirad H, Ladwa R, O’Byrne K, Kulasinghe A. Immune Checkpoint Inhibitors in Cancer Therapy. Curr Oncol. 2022 Apr 24;29(5):3044-3060.

2.  Zam W, Ali L. Immune Checkpoint Inhibitors in the Treatment of Cancer. Curr Rev Clin Exp Pharmacol. 2022;17(2):103-113.

3.  Bernardo M, Tolstykh T, Zhang YA, Bangari DS, Cao H, Heyl KA, Lee JS, Malkova NV, Malley K, Marquez E, Pollard J, Qu H, Roberts E, Ryan S, Singh K, Sun F, Wang E, Bahjat K, Wiederschain D, Wagenaar TR. An experimental model of anti-PD-1 resistance exhibits activation of TGFß and Notch pathways and is sensitive to local mRNA immunotherapy. Oncoimmunology. 2021 Mar 16;10(1):1881268.

4. Agrawal K, Hill RC, Wilkinson BL, Allison PB, Thomas CE. Quantification of the anti-murine PD-1 monoclonal antibody RMP1-14 in BALB/c mouse plasma by liquid chromatography-tandem mass spectrometry and application to a pharmacokinetic study. Anal Bioanal Chem. 2020 Jan;412(3):739-752.

5.   Zhai Y, Dong S, Li H, Zhang Y, Shami P, Chen M. Antibody-mediated depletion of programmed death 1-positive (PD-1+) cells. J Control Release. 2022 Sep; 349:425-433.

6.   Bu MT, Yuan L, Klee AN, Freeman GJ. A Comparison of Murine PD-1 and PD-L1 Monoclonal Antibodies. Monoclon Antib Immunodiagn Immunother. 2022 Aug;41(4):202-209. doi: 10.1089/mab.2021.0068. Epub 2022 Aug 4.

7.  Liu H, Liu Y, Zhao Z, Li Y, Mustafa B, Chen Z, Barve A, Jain A, Yao X, Li G, Cheng K. Discovery of Anti-PD-L1 Human Domain Antibodies for Cancer Immunotherapy. Front Immunol. 2022 Apr 4; 13:838966. doi: 10.3389/fimmu.2022.838966

8.   https://www.thermofisher.com/antibody/product/CD279-PD-1-Antibody-clone-RMP1-14-Monoclonal/14-9982-82 [Extracted information on May 21, 2024]

9.  Yamazaki T, Akiba H, Koyanagi A, Azuma M, Yagita H, Okumura K. Blockade of B7-H1 on macrophages suppresses CD4+ T cell proliferation by augmenting IFN-gamma-induced nitric oxide production. J Immunol. 2005 Aug 1;175(3):1586-92.