抗小鼠VEGF抗体(B20–4.1.1)联用抗PD-1单抗(RMP1-14)增效机制解析
血管内皮生长因子（VEGF）不仅是肿瘤血管生成的重要调控因子，还参与肿瘤免疫抑制，影响免疫细胞浸润、活化及功能状态。
Voron等发表于 Journal of Experimental Medicine 的研究显示，在CT26小鼠结肠癌模型中，肿瘤局部VEGF水平升高，并伴随肿瘤浸润CD8⁺ T细胞表达PD-1、Tim-3、CTLA-4和Lag-3等抑制性受体。该结果提示，VEGF可能通过促进T细胞抑制性表型，参与免疫抑制性肿瘤微环境的形成。
基于这一发现，研究者进一步评估了抗小鼠VEGF抗体(B20-4.1.1)与抗小鼠PD-1抗体(RMP1-14)单独或联合应用时的抗肿瘤效果，并分析其对CD8⁺ T细胞功能的影响[1]。
一、 联用逻辑
1. 抗小鼠VEGF抗体(B20-4.1.1)：阻断VEGF介导的血管生成和免疫抑制
抗小鼠VEGF抗体(B20-4.1.1)可阻断VEGF相关信号。其作用不仅包括抑制肿瘤血管生成，还可能改善VEGF介导的免疫抑制状态。
在本研究中，阻断VEGF后，肿瘤浸润CD8⁺ T细胞表面PD-1及其他抑制性受体表达下降，同时IFN-γ产生能力增强，说明B20-4.1.1抗体能够在一定程度上改善CD8⁺ T细胞的功能状态。
2. 抗小鼠PD-1单抗(RMP1-14)：解除PD-1介导的T细胞抑制
抗小鼠PD-1单抗(RMP1-14)可阻断PD-1相关免疫抑制信号，促进T细胞恢复效应功能。
不过，当肿瘤微环境中VEGF水平较高时，单纯阻断PD-1可能难以充分逆转由血管异常、免疫细胞功能受损及多种抑制性因素共同造成的免疫抑制。因此，PD-1阻断与VEGF阻断具有潜在的机制互补性。
3. 联用的核心逻辑
抗小鼠VEGF抗体(B20-4.1.1)与抗小鼠PD-1单抗(RMP1-14)分别作用于两个相互关联但不同的免疫抑制环节：
- B20-4.1.1：阻断VEGF，改善肿瘤血管及免疫微环境，并降低CD8⁺ T细胞抑制性受体表达；
- RMP1-14：阻断PD-1信号，进一步解除T细胞免疫检查点抑制。
因此，两者联用的核心逻辑可概括为：改善VEGF介导的肿瘤免疫抑制微环境，同时解除PD-1介导的T细胞抑制。
二、 实验设计
- 肿瘤模型与治疗起始时间：研究采用CT26小鼠结肠癌模型。当肿瘤面积达到约 9–10 mm² 时开始注射。
- 抗体注射方案：研究比较了抗小鼠VEGF抗体(B20-4.1.1)、抗小鼠PD-1抗体(RMP1-14)及二者联合治疗对肿瘤生长的影响。
- CD8⁺ T细胞耗竭实验：为验证抗VEGF治疗是否依赖CD8⁺ T细胞，研究者使用抗小鼠CD8a抗体(2.43)进行CD8⁺ T细胞耗竭。如果CD8⁺ T细胞耗竭后B20-4.1.1抗体的抗肿瘤作用减弱，则说明其治疗效果不仅来自血管生成抑制，也依赖CD8⁺ T细胞介导的抗肿瘤免疫。
- VEGF通路相关对照实验：研究者还使用了两种药物（drugs）进行对照：
- Sunitinib：可抑制VEGFR相关信号；
- Masitinib：不抑制VEGFR。
通过比较两种药物对免疫细胞状态的影响，进一步判断相关免疫变化是否与VEGF/VEGFR通路有关。
抗小鼠VEGF抗体(B20–4.1.1)与抗小鼠PD-1抗体(RMP1-14)在该研究中的联用注射方案 – 武汉多找找科技
三、 主要实验结果
1. 肿瘤组织中VEGF升高，并伴随CD8⁺ T细胞抑制性表型增强
在CT26肿瘤模型中，肿瘤局部VEGF水平升高。与此同时，肿瘤浸润CD8⁺ T细胞表达更多PD-1，并伴随Tim-3、CTLA-4和Lag-3等抑制性受体上调。这一结果说明，VEGF升高与CD8⁺ T细胞功能受抑之间存在关联，VEGF可能参与肿瘤免疫抑制微环境的形成。
2. 抗小鼠VEGF抗体(B20-4.1.1)可降低CD8⁺ T细胞抑制性受体表达
阻断VEGF后，肿瘤浸润CD8⁺ T细胞表面PD-1及其他抑制性受体表达下降。这表明，VEGF不仅影响肿瘤血管，还可能直接或间接调节肿瘤浸润T细胞的功能状态。抗小鼠VEGF抗体(B20-4.1.1)通过阻断VEGF，有助于减轻CD8⁺ T细胞的抑制性表型。
3. 抗小鼠VEGF抗体(B20-4.1.1)可增强CD8⁺ T细胞效应功能
抗小鼠VEGF抗体(B20-4.1.1)治疗后，CD8⁺ T细胞产生IFN-γ的能力增强，提示其效应功能得到改善。结合抑制性受体表达下降的结果可以看出，抗VEGF治疗可能通过改善肿瘤微环境，使CD8⁺ T细胞更有利于发挥抗肿瘤作用。
4. 抗小鼠VEGF抗体(B20-4.1.1)的抗肿瘤作用部分依赖CD8⁺ T细胞
当使用2.43抗体耗竭CD8⁺ T细胞后，B20-4.1.1抗体的抗肿瘤作用明显减弱。这一结果说明，B20-4.1.1抗体的作用机制并不只是抑制肿瘤血管生成，还包括激活或恢复CD8⁺ T细胞介导的抗肿瘤免疫。
5. 抗小鼠VEGF抗体(B20-4.1.1)与抗小鼠PD-1抗体(RMP1-14)联用可增强肿瘤抑制效果
在该模型中，RMP1-14抗体治疗效果相对有限，而B20-4.1.1抗体能够明显抑制肿瘤生长。进一步联合使用B20-4.1.1抗体与RMP1-14抗体后，肿瘤抑制效果进一步增强。这一结果支持两种抗体之间存在功能互补：
- B20-4.1.1抗体改善VEGF相关的肿瘤血管和免疫抑制环境；
- RMP1-14抗体解除PD-1介导的T细胞抑制；
- 联合治疗则同时干预VEGF和PD-1两条免疫抑制相关通路。
6. VEGFR相关对照支持VEGF通路参与免疫调节
Sunitinib与masitinib的对照结果进一步提示，相关免疫变化与VEGF/VEGFR通路有关，而不是所有具有抗肿瘤活性的药物都能产生相同的免疫调节效果。这为“VEGF信号参与CD8⁺ T细胞抑制性状态形成”的观点提供了进一步支持。
四、 总结
该研究表明，VEGF在肿瘤中的作用不仅是促进血管生成，还可能通过促进CD8⁺ T细胞表达PD-1、Tim-3、CTLA-4和Lag-3等抑制性受体，参与形成免疫抑制性肿瘤微环境。
抗小鼠VEGF抗体(B20-4.1.1)在CT26小鼠结肠癌模型中能够降低肿瘤浸润CD8⁺ T细胞的抑制性受体表达，增强IFN-γ产生能力，并且其抗肿瘤作用部分依赖CD8⁺ T细胞；进一步与抗小鼠PD-1单抗(RMP1-14)联合后，可获得更强的肿瘤抑制效果。
总体而言，抗小鼠VEGF抗体(B20-4.1.1)与抗小鼠PD-1单抗(RMP1-14)的联用体现了两种互补的治疗思路：
- B20-4.1.1：改善VEGF介导的肿瘤免疫抑制微环境；
- RMP1-14：解除PD-1介导的免疫检查点抑制。
因此，抗PD-1与抗VEGF联合不仅能够同时干预肿瘤血管和免疫检查点，还为研究PD-1/VEGF协同调控肿瘤免疫的机制提供了重要的动物实验依据。
需要注意的是：该研究直接评价的是抗小鼠PD-1单抗（克隆号：RMP1-14.1，Syd Labs有售）与抗小鼠VEGF单抗（克隆号：B20-4.1.1.1，Syd Labs有售）两支单抗的联合应用，并非抗小鼠PD-1/VEGF双抗（克隆号：RMP1-14.1 / B20-4.1.1.1，Syd Labs有售）本身。
五、 参考文献
[1] Terme M, et al. VEGF-A modulates expression of inhibitory checkpoints on CD8+ T cells in tumors. J Exp Med. 2015 Feb 9;212(2):139-48. doi: 10.1084/jem.20140559. Epub 2015 Jan 19. PMID: 25601652; PMCID: PMC4322048.
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