实验指南：4T1与CT26高血管化小鼠同源移植瘤造模及肿瘤生长抑制率（TGI）测定
4T1 小鼠乳腺癌与 CT26 小鼠结肠癌是肿瘤免疫学与肿瘤血管生成研究中最经典的高血管化、高通透性同源移植瘤模型（Syngeneic Models）。由于其肿瘤微环境（TME）中过度表达 VEGF-A 并伴随显著的 PD-L1 免疫逃逸，非常适合用于评估 重组抗小鼠 PD-1 / VEGF-A 双特异性抗体（如 RMP1-14.1 / G6-23） 或单抗联合给药方案的抑瘤药效与血管正常化窗口。
4T1 与 CT26 细胞接种与造模关键步骤
1. 细胞培养与接种准备
使用含有 10% FBS 的 RPMI-1640 培养基培养 4T1 或 CT26 细胞，保持细胞处于对数生长期（汇合度 70%-80%）。消化后使用无血清 PBS 洗涤两次，重悬调整细胞浓度。
2. 小鼠株系选择与皮下接种参数
- 4T1 乳腺癌模型： 推荐选用 6-8 周龄雌性 BALB/c 小鼠，于第 4 对乳腺脂肪垫或原位/皮下接种 1×10⁵ 至 5×10⁵ 个细胞。
- CT26 结肠癌模型： 选用 6-8 周龄 BALB/c 小鼠，于右侧胁腹皮下接种 5×10⁵ 至 1×10⁶ 个细胞。
给药方案设计与肿瘤生长抑制率（TGI%）计算
1. 随机分组与体内给药
当平均肿瘤体积达到 80–120 mm³ 时进行随机分组。建议采用腹腔注射（IP）方式给药：
- 实验组： 给予 重组抗小鼠 PD-1 / VEGF-A 双特异性抗体（Mouse IgG2c LALAPG），推荐剂量 3–10 mg/kg，每周 2–3 次，持续 14–21 天。
- 对照组： 搭配等剂量的 Mouse IgG2c LALAPG Isotype Control 同型对照。
2. TGI 计算标准公式
每 2–3 天用游标卡尺测量肿瘤长径（a）与短径（b），体积计算公式为：V = 0.5 × a × b²。
给药结束时，肿瘤生长抑制率（TGI）的标准计算公式为：
TGI (%) = [ 1 - (V_t,给药组 - V_0,给药组) / (V_t,对照组 - V_0,对照组) ] × 100%
常见问题 FAQ
Q1：4T1 模型在接种后易发生转移与中心坏死，如何把握给药窗口？
A： 4T1 恶性程度高且高表达 VEGF，建议在接种后 7-10 天（肿瘤体积达 100 mm³ 时）立即启动给药，给药周期控制在 18 天以内，重点观察早期原发瘤抑制与血管正常化时间窗。
Q2：给药抗体为什么需要优先推荐无内毒素的重组抗体？
A： 在小鼠体内给药中，内毒素过高会导致巨噬细胞过度激活并释放 TNF-α、IL-6 等炎症因子，掩盖抗体的真实抑瘤药效。因此体内实验级重组抗体内毒素通常需控制在 <1.0 EU/mg。