小鼠体内通路阻断实验指南:从PD-1到CD47的经典克隆号与Fc改造选型
在进行小鼠体内(In Vivo)免疫检查点阻断、受体竞争性结合或细胞信号通路封锁实验时,许多研究者常面临实验结果不可重复、靶细胞被意外清除或小鼠发生非特异性炎症反应等难题。这往往与抗体的纯度、内毒素水平以及 Fc 介导的效应功能(如 ADCC/CDC)密切相关。
本文为您系统梳理小鼠体内阻断抗体的关键选型指标,并汇总 PD-1、PD-L1、CTLA-4、CD47 等常见靶点的经典克隆号与 Syd Labs 重组抗体货号。
一、 体内中和/阻断实验对抗体的核心要求
- 低内毒素与无防腐剂:体内注射对内毒素极度敏感,通常要求超低内毒素(< 0.05 EU/mg),且不得含有叠氮化钠等细胞毒性防腐剂。
- 特异性阻断与 Fc 效应控制:纯粹的阻断实验(如封锁 PD-1/PD-L1 信号通路)要求抗体仅结合靶点而不触发 ADCC(抗体依赖的细胞毒性)或 CDC(补体依赖的细胞毒性)。普通 IgG 的 Fc 段可能结合小鼠 FcγR 受体,导致表达靶点的免疫细胞被误杀。
二、 常见小鼠体内阻断抗体克隆号与分型对比表
Syd Labs采用CHO细胞重组表达技术,不仅提供经典 Wild-Type 结构的重组抗体,还推出了多种 Fc 静默突变型(如 mIgG2c LALAPG, mIgG1 D265A),极大提升了体内阻断实验的严谨性。
| 反应物种 | 靶点 | 克隆号 | 分型 / 工程化改造 | 货号 (产品链接) | 推荐同型对照 (Isotype) |
|---|---|---|---|---|---|
| 小鼠 | PD-1 | RMP1-14.1 | rIgG2a | PA007162.r2a | PA007143 |
| 小鼠 | PD-1 | RMP1-14.1 | mIgG2c LALAPG (静默) | PA007162.m2cLA | PA007141 |
| 小鼠 | PD-1 | RMP1-14.1 | mIgG2a LALAPG (静默) | PA007162.m2aLA | PA007138 |
| 小鼠 | PD-1 | RMP1-14.1 | mIgG1 D265A (静默) | PA007162.m1DA | PA007135 |
| 小鼠 | PD-1 | 29F.1A12.1 | rIgG2a | PA007163.r2a | PA007130 |
| 小鼠 | PD-1 | 29F.1A12.1 | mIgG2c LALAPG (静默) | PA007163.m2cLA | PA007141 |
| 小鼠 | PD-L1 | 10F.9G2.1 | rIgG2b | PA007164.r2b | PA007144 |
| 小鼠 | CTLA-4 | 9D9 | mIgG2b | PA007380.m2b | PA007130 |
| 小鼠 | CTLA-4 | 9D9 | mIgG2c LALAPG (静默) | PA007380.m2cLA | PA007141 |
| 小鼠 | CD16/CD32 | 2.4G2 | rIgG2b | PA007389.r2b | PA007144 |
| 小鼠 | CD19 | 1D3 | rIgG2a | PA007363.r2a | PA007143 |
| 小鼠 | CD28 | 37.51 | mIgG1 | PA007475.m1 | PA007126 |
| 小鼠 | CD40L | MR1 | mIgG1 | PA007452.m1 | PA007126 |
| 小鼠 | CD47 | Miap301 | rIgG2a | PA007639.r2a | PA007143 |
📄 资料下载:小鼠体内中和/阻断抗体经典克隆号与 Fc 选型手册 (PDF)
包含 PD-1、CTLA-4、CD47 等热门靶点的完整克隆号、Fc 静默改造(LALAPG/D265A)及推荐同型对照清单,欢迎下载查阅。
三、 常见问题解答(FAQ)
Q1:阻断实验为什么建议优先选择 Fc 静默(如 LALAPG 或 D265A)分型?
在体内通路阻断实验中(例如使用 RMP1-14.1 阻断 PD-1),如果使用野生型 IgG,抗体的 Fc 段会与巨噬细胞或 NK 细胞表面的 FcγR 结合,从而介导对 PD-1+ T 细胞的杀伤(ADCC 效应)。这会导致“原本只想阻断受体,结果把 T 细胞给清除掉了”的假阳性现象。选择 LALAPG(如 PA007162.m2cLA)或 D265A 突变分型,可以彻底消除 FcγR 结合力,保证抗体只发挥纯粹的受体占位与通路阻断作用。
Q2:体内阻断实验的同型对照(Isotype Control)应该如何选择?
同型对照必须满足三个“一致”原则:相同物种来源、相同 IgG 亚型、相同的 Fc 工程化改造。例如,如果您在实验中使用了 mIgG2c LALAPG 改造的阻断抗体(如 PA007380.m2cLA),对照组则必须选用经过相同 LALAPG 改造的同型对照(如 PA007141),以排除背景噪音干扰。
如需了解更多克隆号的具体规格、注射剂量建议或下载产品说明书,请访问 Syd Labs 官方网站或联系我们的技术支持团队。