EMT6乳腺癌模型中的抗 PD-1（RMP1-14）应用：文献报告实验条件与给药方案汇编
EMT6 乳腺癌模型中的抗 PD-1（RMP1-14）应用
收录状态：本页已收录约 11 条来源，涵盖检查点、共刺激激动与微环境靶点，其中 RMP1-14 已有同行评议给药记录（Front Immunol 2020）。本页随文献更新，新来源出现时逐条补入。
检索截止 2026-10-23
1. EMT6乳腺癌模型概述
EMT6 是 BALB/c 背景的小鼠乳腺癌细胞系。检索到的用法为双侧接种——在两侧腹各接种一个肿瘤，一侧作为直接给药的原发瘤，对侧不直接给药，用于评估远隔效应（abscopal effect）。这是本模型在文献中的一个典型设计，与单侧皮下模型的问题设置不同。
恒定区：BALB/c 背景（Igh1-a 等位），重组小鼠化抗体的同源恒定区为 IgG2a，与 CT26 一致，与 MC38、B16、GL261（IgG2c）相反。
2. EMT6乳腺癌模型中使用的体内功能抗体
2.1 免疫检查点
| 靶点 | 克隆 / 抗体 | 剂量 | 频次 / 起始 | 造模条件 | 证据 | 出处 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| PD-1 | RMP1-14 | 200 µg/只 | D0、4、9、13 | 2×10⁶ 双侧皮下；BALB/c 雌约 10 周；接种后 7 天、100–150 mm³ 起始 | ○ | US12030940 |
| PD-1 | RMP1-14（Bio X Cell） | 100 µg/只 | 每隔一天 × 5 次，D7 起 | 2×10⁵ 细胞接种左侧第二乳腺脂肪垫；D20 切除原发瘤，术后 4 天于右侧接种继发瘤；瘤体积按 (π×长×宽²)/6 计算，1500 mm³ 处死；同一研究并用 4T1 与 E0771 | ◆ | Front Immunol. 2020;11:366 |
| PD-1 | Pi-0004-AB | 5 mg/kg | 见原文 | 皮下右腹侧；BALB/c 雌约 8 周，Taconic；分“小瘤 62 mm³”与“大瘤 173 mm³”两组 | ○ | US12065491 |
| PD-1 | 见原文 | 见原文 | D0 起每 3 天 × 8 次（D0–D21） | 3×10⁵ 皮下右后肢侧；BALB/c 6–8 周；长至平均 75 mm² 时随机分 10 组、每组 10 只 | ○ | US11230601 |
| PD-1 | 见原文 | 见原文 | 见原文 | 1×10⁶ 皮下；每组 6 只；与 9 种靶向新表位的抗体鸡尾酒联合 | ◆ | PubMed 41942529 |
| PD-L1 | 见原文 | 见原文 | 见原文 | EMT6 + Matrigel（50% HBSS + 50% Matrigel）；BALB/c 雌 7 周，日本 Charles River，适应 1 周 | ○ | US12371483 |
| CTLA-4 | 见原文 | 见原文 | 见原文 | EMT-6/P 及其顺铂或环磷酰胺耐药变体；与节拍化疗联合 | ◆ | Br J Cancer 2016（doi:10.1038/bjc.2016.429） |
| CTLA-4 | 见原文 | 见原文 | 见原文 | 与抗 αvβ8 联合，产生 6 例完全缓解 | ○ | US11359024 |
| CD40（激动） | 见原文 | 见原文 | 见原文 | 与 PD-1/PD-L1 阻断联合 | ◆ | 见 Bio X Cell 9D9 产品页所引文献 |
抗 CD40 那条的机制值得单列： 有研究报告抗 CD40 治疗会诱导肿瘤浸润单核细胞与巨噬细胞上调 PD-L1，构成一种获得性耐药；抗 CD40 与 PD-1/PD-L1 阻断联合治疗高度协同，在荷 MC-38 结肠瘤与 EMT-6 乳腺瘤的小鼠中约 50% 完全排斥肿瘤，机制上表现为瘤内 CD8⁺ T 细胞的 IFN-γ 与颗粒酶 B 产生显著增加；同时加用 CTLA-4 阻断可进一步改善已成瘤的排斥率。
2.2 共刺激激动
| 靶点 | 抗体 | 说明 | 出处 |
|---|---|---|---|
| 4-1BB（CD137） | mAb8 | EMT6 5×10⁴ 细胞注入右侧乳腺脂肪垫；BALB/c 雌 7–9 周，Charles River；同一研究并用 CT26、A20、MC38 | US11718679 |
| 4-1BB（CD137） | 激动型（克隆未注明） | 与抗 αvβ8 联合产生 5 例完全缓解；单药约 50% TGI（D8–20）但缓解短暂，肿瘤最终逃逸 | US11359024 |
| CD40 | 激动型 | 见 §2.1 | 同上 |
| OX40 | 见原文 | 与 GA-RG 联合 | US10398778 / US9872909 |
2.3 微环境与其他靶点
| 靶点 | 抗体 | 剂量 | 造模条件 | 出处 |
|---|---|---|---|---|
| αvβ8 整合素 | ADWA11_4 mut（效应失活版） | 10 mg/kg，每 4 天 1 次共 3 次 | 原位第 4 乳腺脂肪垫；Charles River BALB/c，每组 10 只；3×10⁵ 或 1×10⁶ 细胞；50 mm³ 或 100 mm³ 起始 | US11359024 |
| TREM1 | Pi-9067L | 15 mg/kg | 见 §2.1 | US12065491 |
| LAP | 见原文 | 见原文 | 见 §2.1 | US11230601 |
| 潜伏型 TGF-β1 | hT0947AE04-mF18 等 | 见原文 | 见 §2.1；与抗 PD-L1 联合 | US12371483 |
| TGF-β | Ab1 | 10 与 25 mg/kg | 0.5×10⁶ 皮下；BALB/c 雌，上海灵畅；68–116 mm³ 随机、每组 10 只；每周 3 次共 6 次；瘤体积按 长×宽×高 计算 | US12049496 |
抗 αvβ8 一条含两组可直接引用的效应量： 与抗 PD-1 联合 10 只中 7 只完全缓解，与 4-1BB 激动剂联合 5 例完全缓解，与抗 CTLA-4 联合 6 例完全缓解，生存期均优于单药与同型对照组。完全缓解的小鼠在首剂后第 51 天接受第二次 EMT6 接种再攻击、不再给药——幼稚小鼠中肿瘤迅速生长，完全缓解小鼠中则被迅速清除，说明产生的是细胞免疫应答，而非抗血管生成或抗增殖效应。
⚠ 同一份文件里还有一条关于免疫原性的实测记录，值得所有做小鼠体内实验的人注意： 该研究的疗效实验改用了亲本小鼠杂交瘤抗体的效应失活版本（ADWA11_4 mut），原因是人源化版本 ADWA11 2.4 引发了强烈的抗种属药物反应，限制了暴露量。
这是“人源化抗体在免疫功能正常小鼠中因抗药反应导致暴露不足”的直接实例，也是选用小鼠化替代抗体的实测依据——比理论论证有力得多。
3. 造模条件汇总
| 接种量 | 部位 | 品系 / 供应商 | 起始时机 | 出处 |
|---|---|---|---|---|
| 2×10⁶ | 双侧皮下 | BALB/c 雌约 10 周 | 接种后 7 天，100–150 mm³ | US12030940 |
| 3×10⁵ 或 1×10⁶ | 原位第 4 乳腺脂肪垫 | BALB/c，Charles River | 50 mm³ 或 100 mm³ | US11359024 |
| 5×10⁴ | 右侧乳腺脂肪垫 | BALB/c 雌 7–9 周，Charles River | 见原文 | US11718679 |
| 3×10⁵ | 皮下右后肢侧 | BALB/c 6–8 周 | 平均 75 mm² | US11230601 |
| 0.5×10⁶ | 皮下侧腹 | BALB/c 雌，上海灵畅 | 68–116 mm³ | US12049496 |
| 1×10⁶ | 皮下 | BALB/c | 见原文 | PubMed 41942529 |
| 见原文（+ Matrigel） | 皮下 | BALB/c 雌 7 周，日本 Charles River | 见原文 | US12371483 |
| 1×10⁷ 细胞/mL 悬液 | 皮下右腹侧 | BALB/c 雌约 8 周，Taconic | 62 mm³（小）或 173 mm³（大）两组 | US12065491 |
三种接种方式并存：皮下侧腹、乳腺脂肪垫（原位）、双侧皮下。 原位与皮下的免疫微环境不同；双侧接种用于测远隔效应。起始瘤负荷从 50 mm³ 到 173 mm³，跨度超过三倍——US12065491 更是直接把“小瘤 62 mm³”与“大瘤 173 mm³”设为两个平行实验，可见起始瘤负荷本身即为变量。
4. 读数与终点
- 面积与体积两套单位并存：US11230601 以 75 mm²（面积）定义起始时机，其余多用 mm³。不可换算比较。
- 瘤体积公式至少三种：0.5×长×宽²（US12065491）、宽²×长/2（US11230601）、长×宽×高（US12049496）。
- 测量频率：每周 2–3 次。
- 再攻击实验：US11359024 于首剂后第 51 天再接种、不给药，用以区分免疫记忆与非免疫机制。
5. 对照与样本量
| 出处 | 每组 n | 对照 |
|---|---|---|
| US11359024 | 10 | 同型对照组（克隆未注明） |
| US11230601 | 10（共 10 组） | 见原文 |
| US12049496 | 10 | PBS |
| US12065491 | 见原文 | C1.18.4（小鼠 IgG2a）15 mg/kg 与 MOPC-21（小鼠 IgG1）15 mg/kg，按实验抗体亚型分别配对 |
| PubMed 41942529 | 6 | 未治疗、单用 PD-1 抑制剂、正常兔 IgG + PD-1 抑制剂 |
US12065491 的对照配置值得借用： 同时设了小鼠 IgG2a（C1.18.4）与小鼠 IgG1（MOPC-21）两支同型对照，剂量均为 15 mg/kg，与对应实验抗体一致。多支抗体联合时按亚型分别配对，是本页收录来源中做得最规范的一条。 PubMed 41942529 则设了“正常兔 IgG + PD-1 抑制剂”组——在联合实验中把无关抗体的蛋白负荷也控制掉，同属正确做法。
6. EMT6乳腺癌模型特有的注意事项
- 恒定区为 IgG2a（BALB/c 背景）。从 MC38、B16、GL261 沿用 IgG2c 版本会引入 allotype 不匹配。
- 原位 vs 皮下 vs 双侧三种接种方式不可混用（§3）。
- 起始瘤负荷跨度超过三倍，且本身即为变量（§3）。
- 面积与体积两套单位、瘤体积公式至少三种（§4）。
- 激动型抗体（CD40、4-1BB、OX40）的 Fc 需求与阻断型相反：激动活性依赖 FcγRIIB 交联，效应沉默骨架会同时消除交联。本模型激动型抗体用得多，这一点尤其重要。
- 人源化抗体在本模型中有抗药反应导致暴露不足的实测记录（§2.3），长疗程实验应优先考虑小鼠化替代抗体。
- 单药短暂缓解后逃逸是本模型的常见模式（抗 CTLA-4 与 4-1BB 激动剂均见约 50% TGI 但缓解短暂），观察期应足够长以捕捉逃逸。
7. 证据缺口
- 抗 CTLA-4、抗 CD40 在本模型中的具体克隆与剂量仍待补检。
- 多数联合研究未单列各支抗体的单药剂量-效应曲线。
- 无对照抗体的匹配细节。
- 无靶点结合确认或暴露量数据。
- 无效应功能失活形式的数据。
下一步： 补检 PubMed（检索式建议含 EMT6 + PD-1 + 各克隆名），并补充本模型中使用过的其他体内功能抗体（检查点、共刺激激动、清除类），按其他模型页的结构补全章节。
8. 抗体 · 亚型 · 供应商货号对照表
本模型的同源恒定区：IgG2a（BALB/c 背景）。重组小鼠化抗体应优先选用该恒定区；从其他品系的模型沿用抗体会引入同种异体（allotype）不匹配。
| 靶点 | 克隆 | Isotype / Fc 突变 | Bio X Cell 货号 | Syd Labs 货号 |
|---|---|---|---|---|
| PD-1 | RMP1-14 | 大鼠 IgG2a κ（原生） | BE0146 / BP0146 | PA007162.r2a |
| PD-1 | RMP1-14.1 | 小鼠 IgG2c LALA-PG | 未见 | PA007162.m2cLA |
| PD-1 | RMP1-14.1 | 小鼠 IgG2a LALA-PG | CP153 | PA007162.m2aLA |
| PD-1 | RMP1-14.1 | 小鼠 IgG1 D265A κ | CP002 | PA007162.m1DA |
| PD-1 | RMP1-14.1 | 小鼠 IgG2a κ | 未见 | PA007162.m2a |
| PD-1 | RMP1-14.1 | 小鼠 IgG2a D265A | CP151 | PA007162.m2aDA |
| PD-1 | 29F.1A12 | 大鼠 IgG2a κ | BE0273 / BP0273 | PA007163.r2a |
| PD-1 | 29F.1A12.1 | 小鼠 IgG2c LALA-PG | 未见 | PA007163.m2cLA |
| PD-1 | 29F.1A12.1 | 小鼠 IgG2a LALA-PG | CP155 | PA007163.m2aLA |
| PD-1 | 29F.1A12.1 | 小鼠 IgG1 D265A κ | CP005 | PA007163.m1DA |
| PD-1 | 29F.1A12.1 | 小鼠 IgG2a κ | 未见 | PA007163.m2a |
| 同型对照 | — | 大鼠 IgG2a | BE0089 / BP0089 | PA007143 |
| 同型对照 | — | 大鼠 IgG2b | BE0090 / BP0090 | PA007144 |
| 同型对照 | — | 大鼠 IgG2c | 未见 | PA007145 |
| 同型对照 | C1.18.4 | 小鼠 IgG2a | BE0085 / BP0085 | PA007152.m2a |
| 同型对照 | — | 小鼠 IgG2a | BE0085 / BP0085 | PA007129 |
| 同型对照 | — | 小鼠 IgG2a D265A κ | CP150 | PA007136 |
| 同型对照 | — | 小鼠 IgG2a-N297A κ | 未见 | PA007137 |
| 同型对照 | — | 小鼠 IgG2a LALA-PG | CP048 | PA007138 |
| 同型对照 | MOPC-21 | 小鼠 IgG1 | BE0083 / BP0083 | PA007155.m1 |
| 同型对照 | — | 小鼠 IgG1 | BE0083 / BP0083 | PA007126 |
| 同型对照 | — | 小鼠 IgG1 D265A κ | CP047 | PA007135 |
| 同型对照 | — | 小鼠 IgG2b | BE0086 / BP0086 | PA007130 |
| 同型对照 | — | 小鼠 IgG2c | BE0366 / BP0366 | PA005171 |
| 同型对照 | — | 小鼠 IgG2c LALA-PG | 未见 | PA007141 |
⚠ 关于文献中的货号与克隆标注：不要直接照抄。 本汇编在核对过程中发现，有同行评议论文的试剂表把 BE0101 标为“克隆 9H10 抗 CTLA-4”，而该货号对应的实际是抗 PD-L1 克隆 10F.9G2（大鼠 IgG2b κ）；同文对 BE0032（UC10-4F10-11，亚美尼亚仓鼠 IgG）的标注则正确。 试剂表中的克隆名与货号错配是真实存在的，引用他人方法时应回到供应商目录核对，不要沿用论文中的货号-克隆对应关系。
9. 参考文献
- Yamazaki T, et al. J Immunol. 2005;175(3):1586-92. PMID 16034097.
- Martin RM, Brady JL, Lew AM. J Immunol Methods. 1998;212(2):187-92. PMID 9672206.（恒定区与品系对应关系）
- Percie du Sert N, et al. The ARRIVE guidelines 2.0. PLoS Biol. 2020;18(7):e3000410.
- 专利：US12030940。
提示： 我们整理了总册《小鼠体内功能抗体文献汇编》，并依据疾病、模型和抗体克隆号三个维度整理了对应章节的单独文件，便于用户查阅和打印。用户可以根据需要索取总册文件和章节的单独文件。我们会根据相关领域研究进展适时更新内容；注册用户可及时收到最新版本。