B16黑色素瘤模型中的抗 PD-1（RMP1-14）应用

文献汇编声明：所有数值均为文献或专利实施例报告值并标注出处，非推荐剂量。

检索截止 2026-10-22

1. B16黑色素瘤模型概述：这是一个“抗性模型”，不是“效力模型”

B16-F10 是 C57BL/6 背景的黑色素瘤细胞系，在文献中被描述为原发性检查点抗性的教科书式例子。它被广泛使用的原因正是它难治：生长快、同源于 C57BL/6，但对抗 PD-1 极少出现消退。

一个值得写进正文的悖论：B16 理论上应当对免疫治疗敏感——它起源于紫外线照射的小鼠皮肤，携带紫外特征新表位，且在暴露于干扰素-γ 等炎症因子后易于表达 PD-L1。尽管如此，常规研究中 B16 肿瘤在给予抗 PD-1 后很少消退，这使得研究者在评价旨在克服 ICI 抗性的新型联合策略时颇感受挫。多数研究者将这种难治性归因于 B16 肿瘤微环境的内在特性。

对使用者最重要的一条：本模型不适合用于判断某批抗 PD-1 抗体是否有活性。 阴性结果在 B16 中是常态，无法区分“抗体无效”与“模型抗性”。要验证抗体活性应改用 MC38 或 CT26。B16 的用途是“在抗性背景下测试联合策略能否翻盘”。

衍生株须分别对待：文献中出现 B16-F10、B16-F1、B16F10.9、B16-IDO（过表达 IDO1）、B16-GVAX 等，生物学行为不同，剂量数据不可互换。

2. B16黑色素瘤模型中使用的体内功能抗体

2.1 免疫检查点

PMC12366563 的结论值得写进正文： PD-1 + CTLA-4 + LAG-3 三联在 SM1 与 B16-F10 中有良好疗效，并带来更有利的免疫微环境（CD69⁺CD8⁺ T 细胞与 gp100 肿瘤特异性 T 细胞增加、耗竭 T 细胞减少）；而对 ICI 耐药的 SW1 模型不响应该三联，其特征是 TIM-3⁺ 终末耗竭 CD8⁺ T 细胞蓄积——改用抗 PD-1 + LAG-3 + TIM-3 三联后，SW1 与 SM1 出现完全消退。在抗性黑色素瘤中，“加哪一个第三方”取决于耗竭表型，不是随便叠加。

PNAS 2010 的效应量参照： 在该 B16 治疗设置下，Fvax + 抗 CTLA-4 仅治愈 10% 动物，而 Fvax + 抗 PD-1 使近 25% 的动物出现肿瘤排斥。

2.2 共刺激激动

2.3 细胞清除与机制解析

2.4 同型对照——本模型有一个值得抄的范例

PNAS 2010 对每一支实验抗体都配了剂量相等的同型对照：大鼠 IgG 250 µg（配 250 µg 的 RMP1-14）、小鼠 IgG2b 100 µg（配 100 µg 的 9D9）。全部购自同一供应商。

这是本汇编中少见的、按种属与剂量分别配对的做法。多数文献只配一支通用对照，或干脆用生理盐水。做多抗体联合实验时，每个实验臂各配一支剂量匹配的对照，是应当沿用的标准。
PLOS One 2014 则用 Rockland 的仓鼠 IgG 与大鼠 IgG 分别配对 4F10（仓鼠）与大鼠源抗体，同属正确做法。

3. 抗 PD-1（RMP1-14）造模与给药明细

剂量范围：200–250 µg/只，或 5 mg/kg。 起始时机跨度极大：从接种次日到瘤体积 150 mm³。

4. 一条安全性记录，值得单独看

有研究报告：将抗 PD-1 抗体包裹于 PLGA 纳米颗粒并递送至脾脏时，高剂量组小鼠的死亡率显著高于游离抗体组，原因是 T 细胞过度活化；在同时缺乏淋巴结与脾脏的脾切除 LT-α⁻/⁻ 小鼠中该死亡率增高被完全逆转，说明次级淋巴组织在抗 PD-1 相关毒性中起关键作用。降低纳米颗粒剂量后毒性消失，抗肿瘤效果反而显著提高。
这条提示：抗 PD-1 的毒性并非只与总剂量有关，递送方式与组织分布同样决定毒性。改变制剂形式时不能沿用原剂量。

5. 抗 PD-1 相关对照小结

6. 本模型特有的注意事项

1. 不要用 B16 判断抗体活性（见 §1）。
2. 恒定区：C57BL/6 背景，重组小鼠化抗体的同源恒定区为 IgG2c。
3. 衍生株必须写明：F10、F1、F10.9、IDO 过表达株、GVAX 株之间不可互换。
4. Matrigel 的使用会改变成瘤动力学，PMC12366563 用了 Matrigel，多数专利实施例未用。
5. 起始时机是本模型最大的变量：接种次日起始与 150 mm³ 起始，本质上是两种不同的实验问题（预防 vs 治疗已成瘤）。
6. 单药数据缺失：本汇编收集到的条目几乎全部为联合方案。无法从中读出 RMP1-14 在 B16 中的单药剂量-效应关系。

7. 抗体 · 亚型 · 供应商货号对照表

本模型的同源恒定区：IgG2c（C57BL/6 背景）。重组小鼠化抗体应优先选用该恒定区；从其他品系的模型沿用抗体会引入同种异体（allotype）不匹配。

8. 参考文献

1. Identification of anti-TIM-3 based checkpoint inhibitor combinations with activity in immunotherapy refractory melanoma models. PMC12366563.（期刊卷期待补）
2. Targeting antigen-presenting cells by anti–PD-1 nanoparticles augments antitumor immunity. JCI Insight. 2018;3:e122700.（作者待补）
3. Dahan R, et al. Cancer Cell. 2015;28(4):285-295. PMID 26373277.
4. Evaluation of the antitumor activity of moronecidin (piscidin)-like peptide in combination with anti-PD-1 antibody against melanoma tumor. PMC10440138.
5. Yamazaki T, et al. J Immunol. 2005;175(3):1586-92. PMID 16034097.
6. Percie du Sert N, et al. The ARRIVE guidelines 2.0. PLoS Biol. 2020;18(7):e3000410.
7. 专利：US11926668 / US11505600 / US10457725 / US11292842（B16F10.9 + 放疗同族）、US10570138 / US12077542 / US10689388（B16-IDO 同族）、US11278552。