抗小鼠PD-1抗体(29F.1A12)：亚型、Fc 形式、跨模型剂量与可得来源

克隆层文档：本页回答“这支抗体该怎么选、在各模型里大家用多少”；造模步骤、对照设置与逐条文献见各模型页。

文献汇编声明：编纂方无自有实验数据。所有数值均为文献或专利实施例报告值并标注出处，非推荐剂量。
版本 1.0 ｜ 检索截止 2026-09-13 ｜ 证据分级：◆ 同行评议 ｜ ○ 专利实施例

1. 抗小鼠PD-1抗体克隆29F.1A12概述

29F.1A12（文献中亦写作 1A12）是抗小鼠 PD-1 单克隆抗体，原生形式为大鼠 IgG2a κ。原始克隆由大鼠免疫表达小鼠 PD-1 的细胞获得；免疫原描述为 PD-1 cDNA 继以 PD-1-Ig 融合蛋白。与 RMP1-14、J43 一样，29F.1A12 可阻断 PD-1 与其配体的结合。

它与 RMP1-14 的关系是本页的核心：同为大鼠 IgG2a、同为阻断型、机制相同，但亲和力差约 100 倍。

2. 选择克隆29F.1A12的理由，以及要付的代价

2.1 亲和力：亚纳摩尔级，比 RMP1-14 高约 100 倍

有比较研究报告：9G2、MIH6 与 1A12 能以亚纳摩尔亲和力染色并阻断 PD-L1 或 PD-1；RMP1-14 也能染色并阻断 PD-1，但亲和力约低 100 倍。

该研究给出的三条推论，值得逐条引用：

1. 由于 1A12 与 RMP1-14 同为大鼠 IgG2a、同属阻断型，两者机制预期相同，但剂量-效应关系不同。
2. 由于 FDA 批准的人源 PD-1 单抗均具高亲和力与阻断能力，用 1A12 做的小鼠肿瘤免疫治疗实验更接近人类治疗性抗体的模型。
3. 用 RMP1-14 做联合免疫治疗实验，可能因 PD-1 阻断的持续性较弱而错误估计第二个药物的效力。

选型结论：需要准确评估联合方案中第二个药物效力的实验，应优先选 29F.1A12。需要与既往文献可比（RMP1-14 的引用量远大于 29F.1A12）时选 RMP1-14。

2.2 同一篇研究还给出了下一步的建议

该文指出：人源治疗性抗体是低效应功能的人 IgG4，而 1A12 与 RMP1-14 同为具中等效应功能的大鼠 IgG2a；使用 1A12 的同源、无效应功能 Fc 版本，可能实现更好的模拟。这一句是本页最值得注意的一条：文献本身就在推荐“29F.1A12 + 同源无效应功能恒定区”这一形式。这与抗 PD-1 的 Fc 效应功能结论一致（见 §2.3），也正是目前多家供应商已在提供的形式（见 §5）。

2.3 效应功能对抗 PD-1 有害

Dahan 等（Cancer Cell 2015;28(4):285-295，PMID 26373277）报告：抗 PD-1 抗体的体内活性不依赖 FcγR，且具备 FcγR 结合能力反而削弱抗肿瘤活性——机制为 ADCC 清除 PD-1⁺ 效应 T 细胞，以及 FcγRIIB 依赖的 PD-1 激动作用。抗 PD-L1 则相反，其疗效依赖 ADCC。原生大鼠 IgG2a 具中等效应功能，因此其观察到的效应是阻断与 Fc 介导活性的叠加。

2.4 异种序列的免疫原性

有供应商资料明确指出：使用异种序列（如大鼠来源）的单抗在注射入小鼠后具有免疫原性；反复给予此类大鼠来源单抗常引发宿主抗大鼠免疫应答，可能损害抗体效力或导致免疫原性事件。为此，将原生大鼠恒定区替换为无效应功能的小鼠 IgG2a 恒定区后，分子约 65% 为小鼠来源。

• 本汇编另收集到两条独立的实测旁证：有专利文件记载，其疗效实验改用了亲本小鼠杂交瘤抗体的效应失活版本，原因是人源化版本引发强烈的抗种属药物反应、限制了暴露量（见 EMT6 模型页）。
• 有研究为使人源抗体在小鼠体内维持暴露，不得不用 GK1.5 与 YTS 169.4 各 200 µg 瞬时清除 CD4 与 CD8 T 细胞（见 EL4 模型页）。三条来源方向一致：免疫健全小鼠的长疗程实验应优先考虑小鼠化形式。

2.5 一条需要警惕的做法：中途换克隆而不改剂量

有专利实施例记载：该研究在前期使用 29F.1A12、后期改用 RMP1-14，两者每次给药剂量均为 250 µg。考虑到两者亲和力差约 100 倍，同剂量替换在药理上不等价。若某一实验体系内前后两批数据分别来自不同克隆，跨批比较须谨慎。引用该类研究时应确认每一组数据用的是哪个克隆。

3. 抗小鼠PD-1抗体(29F.1A12)恒定区形式与品系匹配

C57BL/6、C57BL/10、SJL、NOD 携带 Igh1-b 等位，IgG2a 基因缺失、表达 IgG2c；BALB/c 等 Igh1-a 品系表达 IgG2a、IgG2c 基因缺失。两者氨基酸序列差异约 16%（Martin RM 等，J Immunol Methods. 1998;212(2):187-92，PMID 9672206）。

可用的恒定区形式：

小鼠实验不能沿用灵长类的 Fc 沉默方案。N297G（NG）与 D265A+N297G（DANG）在小鼠中仍保留强补体激活能力；只有 LALA-PG 在小鼠 IgG2a 与人 IgG1 中同时消除补体结合与 FcγR 依赖的 ADCC；单用 LALA 的小鼠 IgG2a 对 FcγRIII 与 FcγRIV 仍保留减弱的结合（Lo 等，J Biol Chem. 2017;292:3900-3908）。看具体突变，不要看“效应沉默”四个字。代价：完全沉默变体相对野生型 IgG1 有显著的热稳定性下降（Hale，Immunol Rev. 2024），影响保存与冻融。

4. 抗小鼠PD-1抗体(29F.1A12)跨模型剂量速查表

本表按模型排列，回答“这支克隆在各模型里大家用多少”。造模条件、对照设置与逐条文献见各模型页——剂量不能脱离造模条件解读。

跨模型观察：

• 收敛值为 200–250 µg/只，与 RMP1-14 的常用区间（200 µg/只 或 5–12.5 mg/kg）重叠。但两者亲和力差约 100 倍，剂量区间相近并不意味着药效学等价（见 §2.5）。
• 本克隆的公开剂量记录远少于 RMP1-14。本站十七个模型页中，明确记录到 29F.1A12 具体剂量的只有 CT26 与 E0771 两个。E0771 那条更有价值——同一实验中三个靶点同剂量、同方案、同对照。这是选用本克隆的主要实际障碍：可参照的既有条件少。
• 效应失活形式（mIgG2a LALA-PG）在所有模型中均无公开体内剂量数据，尽管多家供应商已有该类产品在售。

5. 抗小鼠PD-1抗体(29F.1A12)：抗体 · 亚型 · 供应商货号对照表

5.1 29F.1A12 各形式

供应商标示的规格参考：有供应商提供 1 / 5 / 10 / 20 mg 规格及多克规模；内毒素研究级 <1 EU/mg、超低内毒素级 <0.5 EU/mg；制剂为 0.01 M PBS pH 7.2、150 mM NaCl，无载体蛋白、无 BSA、无叠氮、无钾盐与防腐剂；纯化用 Protein A 或 G 多步亲和层析。超低内毒素（<0.5 EU/mg）是一个比通行 <1 EU/mg 更严的档位，反复腹腔给药的长疗程实验值得关注这一项。

5.2 对照克隆（选型比较用）

注意 RMP1-30 的方向相反：有研究报告它是激动型克隆、不阻断配体结合；该文并提示，这一大鼠 IgG2b 克隆的体内使用需注意其免疫抑制机制可能同时包含 PD-1 激动与 PD-1 表达效应细胞的清除，且其体内效力可能随局部 Fc 受体可得性与靶细胞 PD-1 水平而变化。

5.3 配套同型对照

配对规则：对照须与实验组在亚型、种属、形式、Fc 突变、缓冲液、内毒素规格上一致。使用重组小鼠化或效应沉默形式时，不能沿用原生大鼠 IgG 对照——那会同时引入种属、亚型、效应功能、缓冲液四重差异。

5.4 含 29F.1A12 臂的双特异性抗体

双抗领域已明显偏向本克隆而非 RMP1-14：这与 §2.1 的亲和力结论一致——双抗的 PD-1 臂若阻断持续性不足，会影响对另一臂贡献的判断。

5.5 常见规格要求

6. 使用注意事项小结

1. 需要准确评估联合方案第二个药物效力时，优先选本克隆（§2.1）。
2. 需要与既往文献可比时选 RMP1-14——本克隆的公开剂量记录少得多（§4）。
3. 阻断用途优先效应沉默形式，并核对具体突变而非标签（§2.3、§3）。
4. C57BL/6 系模型的同源恒定区是 IgG2c，而现成的效应失活产品是 IgG2a LALA-PG（§3 形式空缺）；长疗程实验需注意。
5. 长疗程需评估 ADA 与超敏风险，优先小鼠化形式（§2.4）。
6. 对照必须同恒定区、同突变（§5.3）。
7. 不要在同一实验体系内中途换克隆而沿用同剂量（§2.5）。
8. 引用文献剂量前先核对该文献所用的克隆、恒定区与造模条件（§4）。

7. 证据缺口

• 本克隆的公开体内剂量记录极少：本站十四个模型页中仅 CT26 一个有明确记录。
• 效应失活形式（mIgG2a LALA-PG）在所有模型中均无公开体内剂量数据。
• 未检索到小鼠 IgG2c LALA-PG 形式的市售产品，而九个模型属 C57BL/6 背景（§3）。
• 未检索到本克隆的 ADA 定量数据（滴度、时间窗、剂量阈值）。
• 未检索到本克隆的靶点结合确认或暴露量测定方法学文献（RMP1-14 有一篇 LC-MS/MS 定量论文，PMID 31832706）。
• 亲和力“约 100 倍差异”来自一篇比较研究，未见独立重复。引用时应注明来源。

8. 参考文献

1. A comparison of murine PD-1 and PD-L1 monoclonal antibodies. PMC9451140.（本页核心文献：亲和力比较与选型建议；期刊、作者、卷期待补）
2. Dahan R, et al. FcγRs modulate the anti-tumor activity of antibodies targeting the PD-1/PD-L1 axis. Cancer Cell. 2015;28(4):285-295. PMID 26373277.
3. Identification of anti-mouse PD-1 agonist antibodies that inhibit T cell activation. PMC12500435.（RMP1-30 的激动活性与体内使用注意事项）
4. Horwitz BH, Freeman GJ, Sharpe AH. Regulation of PD-1, PD-L1, and PD-L2 expression during normal and autoimmune responses. Eur J Immunol. 2003;33(10):2706-16.（供应商资料所引的克隆来源文献；须核对该文是否即为 29F.1A12 的原始描述）
5. Martin RM, Brady JL, Lew AM. J Immunol Methods. 1998;212(2):187-92. PMID 9672206.（品系与恒定区）
6. Lo M, et al. Effector-attenuating substitutions that maintain antibody stability and reduce toxicity in mice. J Biol Chem. 2017;292(9):3900-3908.
7. Hale G. Living in LALA land? Forty years of attenuating Fc effector functions. Immunol Rev. 2024.
8. Subclone from CT26 resistant to anti-PD-1 therapy associated with increased expression of genes related to glucocorticoids. PMC11209639.（CT26 中本克隆的给药记录）
9. Percie du Sert N, et al. The ARRIVE guidelines 2.0. PLoS Biol. 2020;18(7):e3000410. 各模型的完整文献列表见对应模型页。