新一代检查点LAG-3/TIM-3/TIGIT抗体选型与剂量指南：Fc需求解析与模型给药速查

克隆层文档：本页回答“这几支抗体该怎么选、在各模型里大家用多少”；造模步骤、对照设置与逐条文献见各模型页。

文献汇编声明：编纂方无自有实验数据。所有数值均为文献或专利实施例报告值并标注出处，非推荐剂量。
版本 1.0 ｜ 检索截止 2026-09-13 ｜ 证据分级：◆ 同行评议 ｜ ○ 专利实施例

1. 把LAG-3/TIM-3/TIGIT这三个靶点放在一页，不是因为它们相似

LAG-3、TIM-3、TIGIT 常被并称为“新一代检查点”，在文献中也多与抗 PD-1 联用。但在恒定区选择这件最关键的事上，三者的答案并不一致——这正是本页最值得带走的内容。

含义：不能把“新一代检查点”当成一个 Fc 类别来处理。 做 PD-1 + TIM-3 + TIGIT 三联时，三支抗体的恒定区方向可能各不相同：抗 PD-1 要沉默、抗 TIM-3 沉默亦可、抗 TIGIT 需要效应功能。用一种统一的骨架做全部三支，至少有一支是错的。

本库的 Fc 方向汇总（八类）： 抗 PD-1 有害 ｜ 抗 PD-L1 小鼠数据有益 but 临床无定论 ｜ 抗 CTLA-4 几乎必需且可增强 ｜ 抗 TIGIT 依赖 ADCC ｜ 抗 TIM-3 不需要 ｜ 抗 CD25 必需但需优化 ｜ 抗 VEGF-A 宜沉默 ｜ 激动型依赖 FcγRIIB 交联。

2. 三支克隆各自的特点

2.1 C9B7W（LAG-3）：阻断功能，但不阻断与 MHC II 的结合

原生形式：大鼠 IgG1 κ。 免疫原为小鼠 CD223-Ig 融合蛋白；蛋白 G 亲和层析纯化。识别 CD223 的 D2 结构域内的表位。

靶点： LAG-3（CD223）是 70 kDa 的 I 型跨膜糖蛋白，属 Ig 超家族，结构与 CD4 相似，与 CD4 一样结合 MHC II 类分子，但亲和力高于 CD4；表达于活化的 CD4⁺ 与 CD8⁺ αβ T 细胞、部分 NK 细胞亚群，以及调节性 T 细胞。与 CD3 复合物协同，负向调节 TCR 信号与 T 细胞稳态扩增。

条对检测有用的性质：C9B7W 与部分其他抗 LAG-3 分子不竞争。 有研究报告 C9B7W 与 FS118m（抗 LAG-3/PD-L1 双抗的小鼠替代分子）非竞争，因此 C9B7W-PE 可用于检测体内给药后 TIL 表面的总 LAG-3（游离与结合形式）；同文并报告 Abcam 的 EPR20294-96 克隆与该双抗的抗 LAG-3 Fab 结构域及 Fcab 结合位点亦非竞争。

含义：若体内治疗用的是其他抗 LAG-3 分子，C9B7W 是现成的非竞争检测克隆——与抗 CD25 的 PC61／7D4 配对同理（见清除类克隆页）。 但反过来不成立：若体内治疗用的就是 C9B7W，则须改用 EPR20294-96 或其他非竞争克隆做检测。 这是本库反复出现的同一条原则：检测克隆不得与治疗克隆竞争同一表位。

2.1.1 LAG-3 单药几乎总是无效——而这恰恰是它最重要的一条数据

补检到的三组独立来源在 MC38 中给出一致结果：

这是本库中“单药阴性不等于无效”最强的一组证据——四组独立来源、三种剂量方案，抗 LAG-3 单药一致无效，而联合抗 PD-1 后无瘤率达 7/8、8/10、10/12。

实际含义：若以单药筛选决定是否推进某个抗 LAG-3 分子，会把它全部筛掉。 本库另有两条同类记录（MC38 的抗 PD-1 + 抗 OX40、EMT6 的 4-1BB 激动剂），但 LAG-3 这一组的证据密度最高。

一条免疫记忆的验证： US10836824 中联合组 12 只有 10 只完全缓解，其中 9 只用 5×10⁵ Colon26 细胞再攻击，全部未长出可测肿瘤，而同等细胞量的幼稚对照小鼠全部长出可触及肿瘤。注意再攻击用的是 Colon26 而非 MC38——这检验的是跨细胞系的交叉保护，比同源再攻击更严格。

2.2 RMT3-23（TIM-3）：靶点表达晚，决定造模设计

原生形式：大鼠抗小鼠 TIM-3。 表位定位于小鼠 TIM-3 的磷脂酰丝氨酸（PS）结合环。

本克隆最实用的一条信息与抗体本身无关，而与造模有关：TIM-3 在 CT26 模型中表达相对较晚（约 D15）。 因此有研究刻意采用较小的接种量（2×10⁵）以减缓肿瘤生长，为 TIM-3 表达留出时间窗。

这是本库中“靶点表达的时间动力学决定接种量与起始时机”最清楚的一个例子。 若按常规接种量（CT26 文献中见到 2×10⁶）造模，肿瘤在 TIM-3 充分表达之前就已长到终点，抗 TIM-3 自然无效——而这会被误读为“该靶点无效”。

推广含义：对任何“活化后才表达”或“晚期才表达”的靶点（TIM-3、LAG-3、ICOS、4-1BB 等），造模条件必须为靶点表达留出窗口。 这一条应在设计联合实验时优先核对。

同类克隆参照： 另有一支大鼠抗小鼠 TIM-3 抗体（专利中记为 Ab M）与 RMT3-23 交叉阻断，结合活化小鼠 T 细胞的 EC50 为 0.1 nM，同样定位于 PS 结合环。该抗体以 mIgG1-D265A（Fc 惰性）恒定区在 CT26 中即可增强抗 PD-1 的疗效——这是 §1 中“TIM-3 不需要效应功能”的依据。

2.3 TIGIT：本库中依赖 ADCC 的证据来自人源化敲入体系

本库 MC38 模型页记录到两组抗 TIGIT 数据，均在靶点人源化的敲入小鼠中进行：

• 克隆 90D9、101E1 等，10 mg/kg，每 3 天 × 6 次，TIGIT 人源化 C57BL/6，150±50 mm³ 分组，TGI 分别为 30.4%、30.9%。
• MC38-hPVR 皮下、hTIGIT 敲入小鼠，2×10⁵ 细胞，80–100 mm³ 随机，5 只/组；该研究直接以具强 ADCC 的 mIgG2a 对比 ADCC 失能的 mIgG1，检验 ADCC 对体内疗效的贡献。

两点限制要说清：

1. 这两组数据都来自人源化敲入体系与人源抗体，不是野生型小鼠加小鼠替代抗体。剂量档（10 mg/kg）与野生型体系不可混用。
2. 本轮未检索到小鼠原生抗 TIGIT 克隆（如 1F4）在野生型小鼠中的具体剂量记录。 这是本页最大的缺口之一。

3. 跨模型剂量速查表

本表按模型排列。 造模条件与逐条文献见各模型页。

跨模型观察：

• TIM-3 的唯一明确剂量是 250 µg/只（CT26），与抗 PD-1 同剂量。
• TIGIT 的剂量记录全部来自人源化敲入体系（10 mg/kg），无野生型体系数据。
• LAG-3 的剂量已补齐，收敛于两套惯例：200–250 µg/只，或 10 mg/kg。 以 20 g 小鼠计两者大致等价。给药频次从“每 4 天 1 次共 3 次”到“每周 3 次共 6 次”不等。
• 抗 LAG-3 单药在 MC38 中一致无效（四组独立来源），联合抗 PD-1 后无瘤率达 7/8、8/10、10/12（§2.1.1）。
• 补检中出现一个本库尚未收录的模型：E0771（C57BL/6 乳腺癌），且该来源为同行评议、同时覆盖本页三个靶点中的两个（LAG-3、TIM-3）加抗 PD-1（29F.1A12），各 200 µg、每 4 天 1 次、对照 2A3。建议将 E0771 列入下一批模型页。
• 另见一个本库未收录的肺癌模型 ASB-XIV（BALB/c），与 MC38 在同一实验中平行比较。
• 同一联合方案跨模型结论相反：PD-1 + LAG-3 共阻断在 MC38 中使 80% 已成瘤动物完全消退，在低免疫原性的 B16F10 中效果甚微。模型选择本身决定结论。
• “加哪个第三方”取决于耗竭表型：PD-1+CTLA-4+LAG-3 三联对 B16-F10 与 SM1 有效、对耐药的 SW1 无效（后者特征为 TIM-3⁺ 终末耗竭 CD8⁺ T 细胞蓄积）；改用 PD-1+LAG-3+TIM-3 后 SW1 与 SM1 出现完全消退。

4. 一组值得直接借用的对照设计

CT26 的抗 TIM-3 + 抗 PD-1 实验中，两支实验抗体各 250 µg，同型对照给到 500 µg——即两者之和。

这解决了联合实验中一个常被忽略的问题：单支 250 µg 的对照无法匹配联合组 500 µg 的总蛋白负荷。

本库记录到的两种正确做法：

1. 按总量匹配（本条，CT26）；
2. 每支各配一支对照（GL261：抗 PD-1 配大鼠 IgG2a、抗 OX40 配大鼠 IgG1；EMT6：小鼠 IgG2a 与小鼠 IgG1 各 15 mg/kg）。

用单支 250 µg 对照去配 500 µg 的联合组则不可接受。

5. 抗体 · 亚型 · 供应商货号对照表

品系与恒定区： C57BL/6 系模型（MC38、B16、GL261、SB28、LLC、CMT167、YUMM、EL4、YTN16P）同源恒定区为 IgG2c；BALB/c 系（CT26、4T1、EMT6、RENCA、A20）为 IgG2a。 ⚠ 本页三个靶点的 Fc 需求不一致（§1），不可用统一骨架处理。

5.1 含本页靶点的双特异性抗体

5.2 配套同型对照

6. 使用注意事项小结

1. 三个靶点的 Fc 需求不一致，不可用统一骨架（§1）。抗 TIGIT 依赖 ADCC，抗 TIM-3 沉默亦可，抗 LAG-3 无数据。
2. C9B7W 阻断 LAG-3 功能但不阻断其与 MHC II 的结合——不能用它检验 LAG-3/MHC II 轴的假设（§2.1）。
3. TIM-3 在 CT26 中约 D15 才表达，造模必须为靶点表达留出时间窗（§2.2）。这一原则适用于所有“活化后表达”的靶点。
4. TIGIT 的现有剂量数据来自人源化敲入体系（10 mg/kg），不可外推到野生型小鼠（§2.3）。
5. 同一联合方案跨模型结论可以相反（§3）。
6. “加哪个第三方”取决于耗竭表型（§3）。
7. 联合实验的对照须按总量匹配或逐支配对（§4）。
8. PD-1 × TIGIT 双抗若用沉默骨架，TIGIT 臂贡献可能被削弱（§5.1）。
9. 抗 LAG-3 单药几乎总是无效，必须以联合方案评价（§2.1.1）。
10. C9B7W 可作其他抗 LAG-3 分子的非竞争检测克隆，但不能检测自身（§2.1）。

7. 证据缺口

• LAG-3 的 Fc 需求仍无任何直接对比数据——剂量数据已补齐，但未见以恒定区为变量的对比实验。这直接影响 LAG-3 × PD-1 双抗的骨架选择（§5.1）。
• C9B7W 的功能性阻断机制仍未见说明（不阻断 MHC II 结合，机制为何？）。
• 小鼠原生抗 TIGIT 克隆（1F4 等）在野生型小鼠中的剂量记录缺失；现有数据全部来自人源化敲入体系。
• RMT3-23 的确切亚型与 Bio X Cell 货号未检索到。
• 未检索到本页三个克隆的任何小鼠化或 Fc 改造市售形式（Ab M 的 mIgG1-D265A 形式未上市）。
• MC38 的 LAG-3 数据目前仅见于临床试验方案文件的转述（Woo SR 等 2012），须回溯原文。
• 未检索到本页克隆的 ADA 定量数据、靶点结合确认或暴露量测定。

8. 参考文献

1. Ngiow SF, et al. Cancer Res. 2011;71:3540.（RMT3-23 在 CT26 中的原始实验设计依据；作者需核实）
2. Woo SR, et al. 2012.（LAG-3 与 PD-1 共阻断；卷期页码待核实，须回溯原文）
3. Identification of anti-TIM-3 based checkpoint inhibitor combinations with activity in immunotherapy refractory melanoma models. PMC12366563.（耐药表型决定联合策略）
4. NF-κB associated markers of prognosis in early and metastatic triple negative breast cancer. Breast Cancer Res. 2024. doi:10.1186/s13058-024-01925-3.（E0771 中三个靶点各 200 µg 的同行评议记录；作者待补）
5. Optimizing anti-PI3Kδ and anti-LAG-3 immunotherapy dosing regimens in a mouse model of triple-negative breast cancer improves outcome by removing treatment-related adverse events. PMC12878477.（C9B7W 250 µg 每周 3 次；给药方案优化；期刊、作者、卷期待补）
6. The tetravalent, bispecific properties of FS118, an anti-LAG-3/PD-L1 antibody, mediate LAG-3 shedding from CD4+ and CD8+ tumor-infiltrating lymphocytes. PMC12061380 / Anticancer Drugs. doi:10.1097/CAD.0000000000001705.（C9B7W 的非竞争检测用途；作者、卷期待补）
7. Dahan R, et al. Cancer Cell. 2015;28(4):285-295. PMID 26373277.（Fc 主线）
8. Martin RM, Brady JL, Lew AM. J Immunol Methods. 1998;212(2):187-92. PMID 9672206.（品系与恒定区）
9. Lo M, et al. J Biol Chem. 2017;292(9):3900-3908.（LALA-PG 在小鼠中的沉默效果）
10. Baudino L, et al. J Immunol. 2008;181(9):6664-9.（D265A 的依据）
11. Percie du Sert N, et al. The ARRIVE guidelines 2.0. PLoS Biol. 2020;18(7):e3000410.
12. 专利出处： US10077306 / US11591392 / US12312403 / US10023634 / US10533052（抗 TIM-3 同族，含 §2.2 与 §4 的数据）、US10973853、US12558406（抗 TIGIT）、US10344089 / US11530267 / US10988535（抗 LAG-3 同族，含 §2.1.1 实验一与实验二）、US10836824（抗 LAG-3，含 Colon26 再攻击）、US11939380（C9B7W 在 MC38 与 ASB-XIV 中的 10 mg/kg 方案）。各模型的完整文献列表见对应模型页。