清除类功能抗体选型指南：2.43、GK1.5、PC61清除效率、检测冲突与跨模型剂量

克隆层文档：本页回答“这几支抗体该怎么选、在各模型里大家用多少”；造模步骤、对照设置与逐条文献见各模型页。

文献汇编声明：编纂方无自有实验数据。所有数值均为文献或专利实施例报告值并标注出处，非推荐剂量。
版本 1.0 ｜ 检索截止 2026-09-13 ｜ 证据分级：◆ 同行评议 ｜ ○ 专利实施例

1. 这一类抗体的用途不是治疗，是归因

2.43、GK1.5、PC61 几乎出现在本库每一个模型页中，但它们的角色与检查点抗体完全不同：它们用来证明“疗效依赖哪一群细胞”。

典型用法是：给某个有效的治疗方案，同时清除某一细胞群，若疗效消失则说明该群细胞必需。这类实验的结论强度完全取决于清除是否彻底、以及清除是否只打掉了预期的那一群。 因此本页关注的三件事是：恒定区是否足以清除、清除效率如何确认、靶点表达谱是否只覆盖预期细胞。

这一类的 Fc 方向统一：效应功能必需。 与抗 PD-1 相反，与抗 PD-L1、抗 CTLA-4 同向。效应沉默形式在这里毫无意义——清除本身就是 Fc 介导的。

2. 三支抗体各自的坑

2.1 2.43（CD8α）：靶点不只在 CTL 上

原生形式：大鼠 IgG2b。 供应商资料载明其体内具清除活性。

但 CD8α 的表达谱比“细胞毒 T 细胞”宽： CD8 主要表达于细胞毒 T 细胞表面，但也见于胸腺细胞、NK 细胞与部分树突状细胞亚群。CD8 通常以 CD8α/CD8β 异二聚体存在，也可以两条 CD8α 链形成同二聚体。

2.2 GK1.5（CD4）：同一个克隆既做清除又做检测，这是个隐患

原生形式：大鼠 IgG2b。 原始描述见 Dialynas DP 等，Immunol Rev. 1983;74:29-56。常用于体内清除 CD4⁺ T 细胞群。

靶点表达谱： CD4 主要表达于大多数胸腺细胞、以及高表达于外周成熟 CD4⁺ T 细胞（含辅助性 T 细胞与调节性 T 细胞）；单核细胞与巨噬细胞也表达 CD4，但水平比 T 细胞低 10–20 倍。

做法：体内用 GK1.5 清除时，检测须换用识别不同表位的抗 CD4 克隆，或改用针对治疗抗体重链的二抗做共染。

GK1.5 亦可改为小鼠 IgG2a 形式： 有供应商以重组技术把原生大鼠 IgG2b 恒定区替换为小鼠 IgG2a，该格式介导更强的细胞毒功能（援引 Nimmerjahn & Ravetch 2005）。

2.3 PC61（CD25）：本库最典型的“Fc 选错就无效”案例

原生形式：大鼠 IgG1（完整克隆名 PC-61.5.3）。

机制已被精确定位：原生 PC61 介导的体内 Treg 清除，依赖吞噬细胞上的单一活化型 FcγR——FcγRIII。 单次注射可清除外周血约 70% 的 CD4⁺FoxP3⁺ 细胞；用 2.4G2 封闭 FcγR 可显著抑制其活性，FcγRIII⁻/⁻ 小鼠对清除耐受；清除 NK 细胞无影响，而用氯膦酸盐脂质体清除巨噬细胞则显著抑制清除效果。

而原生大鼠 IgG1 在瘤内的清除效果差。 有分析指出，肿瘤内 FcγRIIb 高表达加上该抗体 Fc 不合适，导致瘤内 Treg 清除不足；改为 Fc 优化的 PC61 小鼠 IgG2a 后，在已成瘤的 MC38、MCA205、CT26 中显示良好效果——但仅在与抗 PD-1 联用时，单药作用仍弱。

这条与抗 PD-1 的结论方向相反，是本库 Fc 主线的两端：抗 PD-1 因 FcγR 结合而削弱疗效，抗 CD25 却因 Fc 不合适而无法起效。同一个参数，两个靶点上决定成败的方向相反。

PC61 还有一个少被提及的特性：它阻断 IL-2 结合

CD25 与 CD122、CD132 共同组成 IL-2 的高亲和力受体。CD25 在 Treg 上组成性高表达，在效应 T 细胞上仅在活化后短暂低表达；效应 T 细胞的功能由 IL-2 信号增强，而 Treg 则绝对依赖该信号存活。

抗 CD25 克隆分为阻断型与非阻断型两类：

两点含义：

1. PC61 阻断 IL-2 结合，可能同时影响效应 T 细胞的 IL-2 信号，而不只是清除 Treg。若实验结论依赖“只去掉 Treg”，这是一个混杂因素。非阻断型克隆（如 7D4）喺这一点上更干净，且亦有供应商提供其小鼠 IgG2a 改造形式。
2. 7D4 是现成的、不与 PC61 竞争表位的检测克隆——本库 GL261 页收录的研究即以 7D4-PE 检测 CD25。这与 RB6-8C5 / 1A8 的表位冲突恰好相反：抗 CD25 这一对有可用的非竞争检测方案，抗 Gr-1 / Ly6G 没有。 设计清除效率确认时应优先查找是否存在这样的配对。

3. 恒定区形式与品系匹配

本类抗体的 Fc 方向统一为“需要效应功能”，因此不涉及沉默形式的选择，但仍需匹配品系。

C57BL/6 等 Igh1-b 品系表达 IgG2c（IgG2a 基因缺失）；BALB/c 等 Igh1-a 品系表达 IgG2a。两者序列差异约 16%（Martin RM 等，J Immunol Methods. 1998;212(2):187-92）。

一处形式空缺： 本轮检索到的 Fc 优化清除抗体均为小鼠 IgG2a 形式（GK1.5、PC61、7D4 均有）。未检索到 mIgG2c 形式的清除类抗体市售产品，而本库九个模型属 C57BL/6 背景。 本类抗体不加沉默突变，因此 IgG2a 与 IgG2c 的差异不仅涉及免疫原性，还可能涉及与不同 FcγR 的结合特性与清除效力——本轮未检索到直接比较数据，属证据缺口。

4. 跨模型剂量速查表

本表按模型排列。 造模条件与逐条文献见各模型页。

跨模型观察：

• 剂量跨度：100 µg 到 0.5 mg，相差五倍。 本库中 4T1 的 100 µg/只最低，MC38 与非本库的 TC-1 的 300–500 µg 最高。跨模型照搬有过量或不足两种风险。
• 给药时间点差异更大： 有肿瘤接种前 3 周单次给药的（GL261 的 PC61），有接种后 D4–D6 密集给药的，也有 D−1 起持续 8 周的。“清除”的时间窗设计取决于问题是“预防性去掉该细胞群”还是“治疗中去掉”，两者不可互换。
• PC61 的 250 µg 单次、提前 3 周给药是本库中最特殊的一条：这是为在肿瘤接种时已处于 Treg 耗竭状态而设计的，与“治疗期间清除”完全不同。
• A20 的清除剂量缺失是本库最明显的空缺之一——该模型的耐药机制正被提示为 NKG2A/Qa-1b 与 NK 细胞，相关验证实验的剂量却查不到。

5. 清除效率的确认——这一节比剂量更重要

本类实验最常见的缺陷不是剂量不对，是没有确认清除是否成功。

6. 抗体 · 亚型 · 供应商货号对照表

6.1 配套同型对照

6.2 检测用抗体（供实验设计参考，非体内给药）

本库 GL261 页收录研究所用的流式组合可作参照：CD8a-FITC（53-6.7）、CD4-PerCP-Cy5.5（GK1.5，注意 §2.2 的冲突风险）、CD25-PE（7D4）、Foxp3-APC（cFJK-16s）、CD45-PerCP-Cy5.5（30F11）、CD11b-PE（M1/70）、Ly6G/Gr-1-FITC（RB6-8C5）、F4/80-APC（BM8）。

7. 使用注意事项小结

1. 效应功能必需，沉默形式在本类抗体上毫无意义（§1）。
2. 抗 CD8α 不只清除 CTL——还涉及 NK 与部分树突状细胞亚群；需要专一性时用抗 CD8β（§2.1）。
3. 不要用 GK1.5 同时做清除和检测（§2.2）。
4. PC61 原生大鼠 IgG1 瘤内清除不足，瘤内 Treg 清除应用 Fc 优化的 mIgG2a 形式（§2.3）。
5. PC61 阻断 IL-2 结合，可能影响效应 T 细胞；需要干净地“只去 Treg”时考虑非阻断型克隆（§2.3）。
6. 7D4 是现成的非竞争检测克隆，抗 CD25 的清除效率确认有干净方案（§2.3、§5）。
7. 按品系选恒定区；mIgG2c 形式目前缺市售产品（§3）。
8. 外周血清除率不能代表瘤内清除率（§5）。
9. PK136 仅适用于 C57BL/6，BALB/c 须用 TM-β1 或抗 asialo GM1（§6）。
10. 清除的时间窗设计取决于问题是预防性还是治疗性（§4）。

8. 证据缺口

• 未检索到 mIgG2c 形式的清除类抗体市售产品，而本库九个模型属 C57BL/6 背景（§3）。
• 未检索到 mIgG2a 与 mIgG2c 在 FcγR 结合与清除效力上的直接比较数据。
• A20 模型的清除抗体剂量缺失（§4），而该模型的耐药机制正指向 NK 细胞。
• 多数研究未报告清除效率的具体数值（§5）。
• 抗 CD8β 的具体克隆号与货号未检索到（本库 4T1 页仅记为“抗 CD8β”）。
• YTS 169.4、PK136、TM-β1、RB6-8C5、1A8、2.4G2 的亚型与货号未检索到。
• 未检索到本类抗体的 ADA 定量数据；长疗程清除实验（如 8 周持续给药）的异种恒定区免疫原性风险未见评估。

9. 参考文献

1. Dialynas DP, et al. Characterization of the murine antigenic determinant, designated L3T4a, recognized by monoclonal antibody GK1.5. Immunol Rev. 1983;74:29-56.（GK1.5 的原始描述）
2. In vivo depletion of CD4+FOXP3+ Treg cells by the PC61 anti-CD25 monoclonal antibody is mediated by FcγRIII+ phagocytes. PMID 20039297.（PC61 的机制定位）
3. Depletion of regulatory T cells in a mouse experimental glioma model through anti-CD25 treatment results in the infiltration of non-immunosuppressive myeloid cells in the brain. PMC3655451.（GL261 中 PC61 的剂量与检测组合）
4. Nimmerjahn F, Ravetch JV. 2005.（小鼠 IgG2a 的细胞毒功能；卷期页码待核实）
5. Onizuka S, et al. 1999.（7D4 用于 PC61 处理后的检测；卷期页码待核实）
6. Arce Vargas F, et al.（Fc 优化 PC61 在 MC38、MCA205、CT26 中的效果；须回溯原文核对）
7. Martin RM, Brady JL, Lew AM. J Immunol Methods. 1998;212(2):187-92. PMID 9672206.（品系与恒定区）
8. Dahan R, et al. Cancer Cell. 2015;28(4):285-295. PMID 26373277.（Fc 主线）
9. Rose P, et al. Anti-Gr-1 antibody provides short-term depletion of MDSC in lymphodepleted mice with active-specific melanoma therapy. Vaccines. 2022;10(4):560.（RB6-8C5 与 1A8 的表位竞争）
10. Percie du Sert N, et al. The ARRIVE guidelines 2.0. PLoS Biol. 2020;18(7):e3000410.各模型的完整文献列表见对应模型页。